Маршрут охоплює кілька районів міста: від центру через Поділ, Куренівку, Троєщину та Деснянський район — до лівого берега і назад.

Від Вокзальної площі автобус прямуватиме вулицями Симона Петлюри, Саксаганського, Галицькою площею, Берестейським проспектом, вулицями В’ячеслава Чорновола, Глібова, Січових Стрільців, Юрія Іллєнка, Герцена, Овруцькою, далі Подільським узвозом, вулицями Кирилівською та Куренівською до проспекту Степана Бандери.

Потім маршрут пролягатиме через Північний міст, проспект Романа Шухевича, вулиці Оноре де Бальзака (парна сторона), Олександри Екстер, проспект Червоної Калини, вулиці Рональда Рейгана, Братиславську, Лісовий проспект, Мілютенка, Шолом-Алейхема, Миропільську, Князя Романа Мстиславича, Андрія Малишка, Броварський проспект, Раїси Окіпної, Русанівську набережну та проспект Соборності.

У зворотному напрямку автобус поїде через міст Патона, бульвар Миколи Міхновського, бульвар Лесі Українки, вулицю Басейну, Бессарабську площу, бульвар Тараса Шевченка та вулицю Симона Петлюри — знову до Вокзальної площі.

Перший рейс від Залізничного вокзалу «Центральний» стартує о 01:00. Маршрут №131-Н входить до мережі чотирьох нічних автобусів, які запустили від вокзалу.