Маршрут охватывает несколько районов города: от центра через Подол, Куреневку, Троещину и Деснянский район — на левый берег и обратно.

От Вокзальной площади автобус поедет по улицам Симона Петлюры, Саксаганского, Галицкой площади, Берестейскому проспекту, улицам Вячеслава Черновола, Глебова, Сечевых Стрельцов, Юрия Ильенко, Герцена, Овруцкой, далее по Подольскому спуску, улицам Кирилловской и Куреневской до проспекта Степана Бандеры.

Затем маршрут пройдет через Северный мост, проспект Романа Шухевича, улицы Оноре де Бальзака (четная сторона), Александры Экстер, проспект Червоны Калины, улицы Рональда Рейгана, Братиславскую, Лесной проспект, Милютенко, Шолом-Алейхема, Миропольскую, Князя Романа Мстиславича, Андрея Малышко, Броварской проспект, Раисы Окипной, Русановскую набережную и проспект Соборности.

В обратном направлении автобус поедет через мост Патона, бульвар Николая Михновского, бульвар Леси Украинки, улицу Басейную, Бессарабскую площадь, бульвар Тараса Шевченко и улицу Симона Петлюры — снова к Вокзальной площади.

Первый рейс от Железнодорожного вокзала «Центральный» стартует в 01:00. Маршрут №131-Н входит в сеть из четырех ночных автобусов, запущенных от вокзала.